Особенности пробоподготовки для электронно- микроскопическго исследования кишечных вирусов

Кашников Александр Юрьевич

Целью исследования является повышение чувствительности метода электронно-микроскопической детекции кишечных вирусов, которые сложно выявить по причине низкого содержания в пробе или малого размера. Для решения поставленной задачи, процесс приготовления вирусных препаратов был дополнен некоторыми методическими приемами, касающимися концентрирования вирусов и иммобилизации на подложке электронно-микроскопической сеточки. Применение приемов, позволяющих с большей вероятностью обнаружить кишечный вирус в пробе, было основано на использовании информации о значении порогового цикла Ct, определяемого методом ПЦР в режиме реального времени. К вирусу с низким содержанием в пробе (Ct ≥ 20), применялся модифицированный вариант концентрирования, позволяющий максимально собрать вирус для обнаружения в электронном микроскопе. Для вирусов, обладающих малыми размерами (d ≤ 40 нм), которые сложно обнаружить методом обычной электронной микроскопии, создавались специальные условия, облегчающие их выявление среди сопутствующих им мелких включений. Эти условия, способствовали образованию неспецифических комплексов вирусных частиц. При приготовлении вирусных препаратов, предназначенных для просмотра в электронном микроскопе также создавались условия, облегчающие поиск вируса. Для этого поверхность подложки электронно-микроскопической сеточки обрабатывали с помощью приемов, способствующих не только повышению уровня адсорбции вируса на сеточке, но и изменению характера его иммобилизации на ней. Положительный эффект применения предложенных методических приемов проиллюстрирован электронограммами кишечных вирусов.

Ключевые слова:просвечивающая электронная микроскопия, кишечные вирусы, методы концентрирования вирусов, пороговый цикл